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SHSY5Y細胞分化后Eph的表達變化

時間:2019-04-07 18:33來源:畢業論文
在體外培養SHSY5Y細胞并利用膠質細胞源性神經營養因子GDNF誘導其分化為多巴胺能神經元,使用western blot的方法檢測Ephrin-A3的含量變化來檢驗實驗的成功與否

摘要:帕金森病已經成為中老年人常見的運動障礙性疾病之一,其主要病理是多巴胺能神經元的大量減少,目前研究最多的是細胞替代治療方法。本實驗是在體外培養SHSY5Y細胞并利用膠質細胞源性神經營養因子GDNF誘導其分化為多巴胺能神經元,使用western blot的方法檢測Ephrin-A3的含量變化來檢驗實驗的成功與否。34345
畢業論文關鍵詞:SHSY5Y細胞、GDNF、多巴胺、帕金森病、Ephrin-A3
The expression of Eph after SHSY5Y cells  differentiation
Abstract: Parkinson's disease is one of the movement disorders in the elderly,it’s main pathology is a significant reduction in dopaminergic neurons. At present,the cell replacement therapy was mostly studied. In this experiment SHSY5Y cells is cultured in vitro and glial cell-line derived neurotrophic factor is used to induce it differentiate into dopaminergic neurons. Using the western blot method to detect changes in the content of Eph to test the success or failure.
Keywords:  SHSY5Y cells、GDNF、DA、Parkinson's disease、Ephrin-A3
1 前言
帕金森病是一種緩慢發生的選擇性中腦黑質多巴胺能神經元喪失和紋狀體多巴胺含量明顯減少的神經系統退行性疾病[1],發病率隨年齡而上升,在 65 歲以上的老年人口中約為 1%[2],極大地困擾了中老年人的正常生活。在正常情況下,大腦黑質中的多巴胺神經元能夠利用酪氨酸羥化酶將左旋酪氨酸轉化為左旋多巴后再同脫羧酶作用轉化為多巴胺。作為神經遞質的多巴胺經黑質-紋狀體束轉運至紋狀體的尾狀核和殼核細胞中進行履行傳遞信號的職責。而帕金森病人的多巴胺水平較少直接導致了錐體外系功能的失調,從而出現了靜止性震顫、肌僵直、動作減少及平衡障礙[3-4]等帕金森病的常見臨床表現。由于帕金森病理主要是黑質多巴胺神經元的變性導致紋狀體內多巴胺水平降低,所以目前的藥物治療和外科手術等手段仍舊無法從根本上解決這個問題。隨著現代醫術的發展,細胞替代治療開始興起,能否利用該手段獲得多巴胺能神經元并通過細胞移植來恢復神經環路中的多巴胺遞質水平來進行帕金森病的治療[5],成為醫療界關注及探索的熱點。 源¥自%六:維;論-文'網=www.aftnzs.live
SHSY5Y細胞即人骨髓神經母細胞瘤細胞株,衍生于人的神經母細胞瘤細胞SK2N 2SH,它具有神經突樣的細胞質突起,表達兒茶酚胺能神經元特有的酪氨酸酶羥化酶。雖然SHSY5Y細胞是探討神經退行性疾病發病機制的常用細胞模型,但SHSY5Y細胞在形態學或基因表達上與腦內神經細胞比都存在較大差異,故需要誘導因子GDNF體外誘導SHSY5Y細胞分化[6]。膠質細胞系源性神經營養因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF),屬于轉化生長因子β(transforming growth factor β,TGF-β)超家族成員[7],能夠誘導神經干細胞定向分化為多巴胺能神經細胞,并可能對SHSY5Y細胞同樣如此。多巴胺能神經元是指主要以酪氨酸羥化酶(TH)陽性細胞、多巴胺轉運體(DAT)及促紅細胞生成素肝細胞( erythropoietin producing hepatocyte receptor, Eph 受體)等其他表型標志物為特征的神經元。
其中促紅細胞生成素肝細胞(Eph 受體)及其配體 ephrin統稱為 Eph 蛋白家族[8],是酪氨酸激酶家族中的最大成員。Eph 受體可分為兩個亞類,即Eph A和Eph B[9]。通常EphA 與 EphrinA 通過相互作用并結合成受體- 配體復合物,在神經系統發育、軸突生長導向等方面發揮重要的生理作用。其中EphA1(其配體是Ephrin-A3)能夠增加細胞對凋亡刺激的敏感性,因此其配體也具有同樣效應[10],該效應對PD患者神經元死亡有作用[11-12]。本研究主要是利用SHSY5Y細胞具有的潛在分化能力,使用誘導因子GDNF進行定向誘導,利用Western Blot的方法檢測蛋白Ephrin-A3表達含量的變化以鑒定此次實驗的成功與否。 SHSY5Y細胞分化后Eph的表達變化:http://www.aftnzs.live/yixue/20190407/31818.html
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