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競爭性種群模擬的質粒構建

時間:2019-07-06 12:38來源:畢業論文
模擬一個二元競爭性合作種群,用于進化生物學研究。使用Aat2與Mlu1對實驗室已有的185,186質粒進行雙酶切,分別分離純化含有luxR-lasI和lasR-luxI的大片段

摘要:本課題的目的是:利用合成生物學方法,構建2個群體感應質粒,模擬一個二元競爭性合作種群,用于進化生物學研究。使用Aat2與Mlu1對實驗室已有的185,186質粒進行雙酶切,分別分離純化含有luxR-lasI和lasR-luxI的大片段;以大腸桿菌MG1655總DNA為模板擴增乳糖通透酶lacY基因片段,連接通用載體pUC-Tm,藍白斑篩選后取陽性克隆純化質粒,雙酶切后分離純化lacY小片段,將大小片段連接后轉化敲除了lacY基因的大腸桿菌MG1655(ΔlacY)。論文主體工作已經完成。36829
畢業論文關鍵詞:合作種群;質粒拼接;轉化;群體感應
 Plasmid construction of competitive cooperation population
Abstract:We make double digestion of target plasmid with Aat2 and Mlu1.Reserve the product of digestion. Then we link these fragments with T4DNAligase.At the same time prepare competent cells from Escherichia coli. Transform target plasmid into Escherichia coli. Find the target colonies and recycle the plasmids. These plasmids are tested by AGE.  They shall be reexamined if their sizes after double digestion are fit. Keep the strain and undergo gene sequencing.
Key Words:cooperation population; recombinant plasmid; transform; social evolution theory
目錄
1 緒論    - 1 -
1.1 微生物合作關系    - 1 -
1.2 群體感應系統的發現    - 1 -
1.3 基于群體感應的細菌合作與欺騙行為    - 2 -
1.4 爭性種群的設計    - 2 -
1.5 pLuxRLasI質粒與pLuxILasR質粒簡介    - 2 -
1.6 實驗主要內容    - 4 -
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2 實驗方法與材料設備    - 5 -
2.1 材料與方法    - 5 -
2.1.1 菌種與質粒    - 5 -
2.1.2 實驗材料與試劑盒    - 6 -
2.1.3 主要儀器和設備    - 7 -
2.1.4 培養基的制備    - 8 -
2.2 實驗方法    - 8 -
2.2.1 細菌基因組DNA的分離純化(SDS法)    - 8 -
2.2.2 瓊脂糖凝膠電泳與割膠回收    - 9 -
2.2.3 PCR    - 10 -
2.2.4 雙酶切與鏈接    - 10 -
2.2.5 感受態細胞的制備    - 11 -
2.2.6 質粒回收    - 12 -
3 實驗方案,結果與討論。    - 12 -
3.1 實驗方案與結果    - 12 -
4 結論與心得    - 18 -
致  謝    - 19 -
參考文獻    - 20 -
1緒論
1.1微生物合作關系
微生物群落在自然界中發揮著重要作用,它執行著細菌個體無法完成的任務,例如協調個體代謝,執行連續多步反應等,并且比個體種群更穩定更耐沖擊。因此人們觀察到微生物表現出來許多群體性社會行為,而這些行為以前被認為只有在復雜的高等生物中才存在,如在包括覓食、擴散等許多生物學活動中表現出多種形式的社會學行為[1]。這些新發現對人們從嶄新的角度認識微生物,從而更好地控制或利用微生物將產生深遠的影響。
單個的微生物個體是脆弱的,而通過群居生活可以獲得3個方面的有益之處:
(1)通過形成群體,微生物才能夠有效的抵抗不利于生存的外界環境,包括抗生素和宿主抵抗力的清除作用;

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(2)微生物通過群居生活,形成獨特的生態環境,從而獲得單個的個體難以獲得的營養成分;
(3)微生物在生物膜中,個體之間的基因水平傳遞頻率明顯增加,通過這種水平傳遞,微生物獲得新的基因和新的生物學特征,從而為更好地適應環境提供新的策略和方法[2]。
這種群居的生活方式意味著微生物個體之間存在著廣泛的合作和沖突的行為,對這些行為特征的研究以前都集中在哺乳動物、昆蟲等多細胞生物上。隨著人們從分子和基因水平上對微生物進一步深入研究,一些社會學的概念包括進化理論開始進入微生物學領域。在這樣的研究背景下,有人提出了社會學和微生物學的全新的交叉學科———社會細菌學、社會微生物學,該學科研究對象是微生物的群體行為[3]。 競爭性種群模擬的質粒構建:http://www.aftnzs.live/shengwu/20190706/35418.html
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