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G6Pase在SHSY5Y細胞分化后的鑒定

時間:2019-04-26 21:55來源:畢業論文
帕金森病是中樞神經系統退行性疾病,主要病變原因是多巴胺(DA)含量降低。本實驗以GDNF誘導SHSY5Y細胞分化,通過鑒定G6 Pase含量的變化來檢驗SHSY5Y細胞是否分化為DA細胞成功

摘要:帕金森病是中樞神經系統退行性疾病,主要病變原因是多巴胺(DA)含量降低。本實驗以GDNF誘導SHSY5Y細胞分化,通過鑒定G6  Pase含量的變化來檢驗SHSY5Y細胞是否分化為DA細胞成功。34894
畢業論文關鍵詞:帕金森病    SHSY5Y細胞    DA
Identify the G6 Pase after the SHSY5Y cell differentiation
Abstract: Parkinson's disease is a degenerative diseases of the central nervous system, the main reason is that dopamine (DA) content decreased. In this paper, the SHSY5Y cells were induced by GDNF to dopaminergic neurons, identified by G6 Pase to test whether the SHSY5Y cells differentiation into DA.
Keywords: Parkinson's disease     SHSY5Y cell     DA
前言
帕金森病(PD)是一種由錐體外系功能障礙引起的慢性中樞神經系統退行性疾病,癥狀主要為肌強直、運動遲緩和共濟失調,嚴重者有記憶障礙和癡呆等癥狀。1817 年,第 1 例 PD被英國醫生James Parkinson報道[1]。
PD的主要病變區域是中樞神經系統的黑質-紋狀體多巴胺能神經通路,該通路受阻時DA合成減少,含量降低,造成多巴胺能神經功能減弱[2] 。研究發現,該病有兩種治療機制,一為內源性的神經干細胞的內在基因調控,二為外源性的體外提供化學誘導劑或細胞因子誘導。Mimura 等[3]證實了通過腦內多巴胺能神經元的移植來改善PD動物模型的行為學。Piccini和Lindball 也做了相似的研究[4,5]。
GDNF即膠質源性神經營養因子,能支持、保護和修復多巴胺能神經元, 也對神經干細胞分化為多巴胺能神經元起作用,還對運動神經元、神經細胞和外周神經組織也有一定的作用[6,7,8]。在多巴胺能神經元區域,GDNF分布廣泛,也表達在嗅結節、梨狀區等[9]。PD的特征是多巴胺能神經元的缺失,而SHSY5Y細胞具有和神經干細胞相似的分化能力,具有多巴胺能神經元的特點,如:合成多巴胺和去甲腎上腺素,表達多巴胺轉運蛋白( DAT) 等,且易得到[10],對研究神經細胞來說,是一種較為理想的細胞模型[11]。Gage[12]提出,神經干細胞是可生成神經組織(或者來源于神經系統的)具有自我更新能力,且能夠通過不對稱細胞分裂產生新細胞。本次實驗是通過檢測G6 Pase來判斷SHSY5Y細胞是否分化成功,G6 Pase是多巴胺能神經細胞中一個功能性蛋白,若其含量上升則說明分化成功。
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實驗部分
1  實驗材料
實驗試劑:SDS-PAGE凝膠、10%過硫酸銨、SDS-PAGE電泳液、轉膜液、DAB混合液、洗滌液、封閉液、一抗和二抗稀釋液、β-actin、山羊抗兔lgG辣根酶(二抗)、一抗(G6 Pase)、蛋白Marker、蛋白。
實驗儀器:SDS-PAGE電泳設備;轉膜儀;脫色搖床;顯影暗室;移液槍。
2  實驗步驟
2.1 前期工作的準備
無菌潔凈室用75%酒精浸泡過的棉球擦拭;移液槍槍頭高壓滅菌;玻璃板洗凈烘干;配制電泳液:Tris粉末15.1g、Glycine(甘氨酸)94g、SDS5.0g,用蒸餾水定容至1L;配制轉膜液(要冷藏):Tris粉末3.03g、Glycine14.42g、甲醇150ml,用蒸餾水定容至1L。 G6Pase在SHSY5Y細胞分化后的鑒定:http://www.aftnzs.live/shengwu/20190426/32594.html
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