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血紅蛋白類納米氧載體HBOCs的研究

時間:2019-04-19 21:14來源:畢業論文
設計了能表達人白蛋白-血紅蛋白融合蛋白了質粒。本研究首先對該質粒pSUMO-ALB-Hb進行了鑒定。接著,將其導入大腸桿菌進行了誘導表達。最后對表達出的人白蛋白-血紅蛋白融合蛋白進行

摘要:血液短缺已成為世界性問題,加之傳統輸血存在多種限制,如:血液的配型,病毒的感染以及短的保存期限等,更加劇了醫療用血緊張的狀況。因此,加大對人工血液替代品的研究已成為人們的共識。然而,多聚血紅蛋白類氧載體存在的腎毒性和高血壓的副作用,依舊是實際應用的巨大障礙。34667
為了克服多聚血紅蛋白類氧載體存在的腎毒性和高血壓的副作用,本實驗室提出了重組表達白蛋白-血紅蛋白融合蛋白的制備人造血的方法。人白蛋白和血紅蛋白融合蛋白的分子量足夠大,使得重組四聚體不能夠穿過血管壁而造成腎毒性作用;而且白蛋白帶有大量負電荷,與毛細血管內皮細胞糖萼所帶的負電荷相互排斥,使得重組四聚體蛋白在血管中央流動,不會產生NO的清除作用,從而降低升高血壓的可能。
本實驗室設計了能表達人白蛋白-血紅蛋白融合蛋白了質粒。本研究首先對該質粒pSUMO-ALB-Hb進行了鑒定。接著,將其導入大腸桿菌進行了誘導表達。最后對表達出的人白蛋白-血紅蛋白融合蛋白進行了初步的鑒定。這些工作為進一步深入研究人白蛋白-血紅蛋白攜氧功能打下了基礎。
畢業論文關鍵詞:白蛋白,血紅蛋白,氧載體,融合蛋白,原核表達
Research on the nanodimension hemoglobin-based oxygen carrier(HBOCs)
Abstract: The blood shortage has become a worldwide problem in current and next several decades. The  restrictions of traditional transfusion (e.g. The need for cross-matching of donated blood, the risk of infecting virus and short-term blood) exacerbate the tension of blood supply, so development of blood substitutes bring good news for this. However, the side effects of HBOCs, nephrotoxicity and hypertension, still a problem for the safety of blood transfusion. In order to solve these problems,we promote a way which is to build a plasmid containing ALB-Hemoglobin fusion gene. It can express human albumin and hemoglobin fusion protein which is five bigger than hemoglobin tetramer. So it cannot pass through kidney. On the other hand, one albumin carrys negative charges, which reject with negative charge of blood capillary endothelial cell sugar calyx, making fusion protein flow in centre of vascular. Consequently, it won’t scavenge NO in endothelial cell. We design a plasmid with ALB-Hemoglobin fusion gene. This research is to  identify pSUMO-ALB-Hb and then transform it to E.coil. We also identify ALB-Hb fusion protein preliminarily. This work can be the base of our next deep research on the function of HBOCs. 源¥自%六^^維*論-文+網=www.aftnzs.live
Keywords:Albumin,Hemoglobin,Oxygen carrier,Fusion protein,Prokaryotic expression
目錄
摘要    I
Abstract    II
目錄    III
緒論    1
1.1引言    1
1.2血紅蛋白    1
1.3血液替代品    2
1.4血紅蛋白類氧載體(HBOCs)    2
1.5本文提出的解決方案    3
實驗設備和耗材    4
2.1實驗設備和試劑    4
2.1.1儀器和設備    4
2.1.2試劑    5
2.2 培養基和溶液的配制    5
2.2.1 LB(Luria-Bertani)培養基的配制    5
2.2.2 溶液的配制    6
2.2.3 DNA瓊脂糖凝膠和蛋白質SDS-PAGE凝膠的制作    8
2.3表達載體的構建    9
2.3.1 pSUMO-Mut-ALB-Hbα和pSUMO-Mut-ALB-Hbβ質粒的構建    9
2.3.2 使用菌株    9
重組質粒的轉化    9
3.1 CaCl2感受態細胞的制備    9
3.2 熱激法將轉化重組質粒    10
3.3質粒的微量提取及其酶切驗證    10 血紅蛋白類納米氧載體HBOCs的研究:http://www.aftnzs.live/shengwu/20190419/32256.html
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