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纖維素酶產生真菌分離純化與鑒定

時間:2019-04-19 21:13來源:畢業論文
通過利用饑餓培養的方式從若干植物中、腐木、腐葉等中分離出了大量的真菌,然后再利用PDA培養基進行不斷的菌種純化,接著我再利用剛果紅培養基進行初步篩選,從中挑選出能產生

摘要:在當今世界能源日趨枯竭的背景下,利用纖維素酶活力高的真菌來將秸稈中的纖維素分解成寡糖或多糖并發酵成生物燃料乙醇,將之作為替代能源,這具有廣闊的應用情景。我國的農作物秸稈資源十分豐富,而且種類多樣,而秸稈中含有豐富的纖維素,還有一定的木質素和半纖維素。如果利用高纖維素酶活力的真菌處理秸稈進行發酵產燃料乙醇,將是對資源的可再生利用,而且也保護了農村的環境,增加農民的收入。本實驗中,通過利用饑餓培養的方式從若干植物中、腐木、腐葉等中分離出了大量的真菌,然后再利用PDA培養基進行不斷的菌種純化,接著我再利用剛果紅培養基進行初步篩選,從中挑選出能產生透明圈和透明圈較大的菌株,接到麩皮固體產酶培養基中,然后測出固體培養基中的菌株的酶活力。通過一系列數據的計算與分析,最終選出纖維素酶活力高的一株菌株,最大酶活力為648.92U/g,經ITS鑒定為類柯柯豆毛色二孢(Lasiodiplodia pseudotheobromae)。34666
畢業論文關鍵詞:纖維素酶;生物燃料乙醇;農作物秸稈;酶活力
Separation,Purification and appraisal of cellulase producing fungi
Abstract: Under the background of the gradual exhaustion of the energy sources in the world. It has a broad application prospect to produce biofuel ethanol as substituted energy using crop straw. But crop straw was composed of cellulose and some lignin & hemicellulose. It is important to decompose the cellulose in the straw into oligosaccharides or polysaccharides. We try to find fungi which have high cellulase activity to decompose straw for bio-fuel ethanol production. It can not only make the resource renewable, but also protect the rural environment and increase farmers' income. In this experiment, We separated lots of fungi from rot wood and leaves by hunger cultivation method,then purify the fungi using the PDA medium. Fungi were screened using the Congo Red medium by the size of transparent cycle. Then the fungi were inoculated in the solid bran enzyme-yielding medium. Afterwards, The cellulase activity was measured by calculating and analyzing the data, one fungus was selected which have high cellulase activity. Its maximal cellulase activity is 648.92U/g. It is Lasiodiplodia pseudotheobromae via blast of the sequence of ITS in NCBI. 源¥自%六^^維*論-文+網=www.aftnzs.live
Key words: Cellulase; biofuel ethanol; crop straw; cellulase activity
 
目錄
引言    1
1 材料與方法    2
1.1實驗設備    2
1.2 實驗試劑和藥品    2
1.3 培養基    3
1.4真菌的分離    4
1.5 菌種的純化    4
1.6 菌種的初步篩選    5
1.7 菌種的復篩——DNS法測定纖維素酶活力    5
1.8 液體PDA培養    7
1.9 載玻片培養觀察法[9]觀察菌種的菌絲和孢子形態結構    7
1.10 DNA的提取(氯化芐法)與保存    7
1.11 PCR擴增ITS    8
1.12 電泳    8
1.13 菌株ITS鑒定    8
2 結果與分析    8
2.1 酶活性分析    9
2.2 1號菌株的電泳圖譜    15
2.3 分類地位    16
3 討論    17
4 致謝    18
參考文獻    19
引言
隨著我們國家經濟的飛速發展,我們的石油對外具有越來越大的依賴性。此外,我國經濟高速發展帶來的環境問題不容小覷,越來越嚴重了。而且這使得人們把目光投向了可再生的清潔能源。我國的化石燃料資源儲備量相對不足,能源的利用率也不是很高。面對上述出現的嚴峻問題,我國政府十分重視,做出了一系列的方針政策,如財政補貼、減免稅收和鼓勵科研力度來來發新的、可再生的清潔能源。其中生物燃料乙醇就是清潔可再生能源中的典型代表。生物燃料乙醇可用小麥、甘薯、高粱、玉米等農作物通過生物乙醇發酵方法生產。但是,用小麥、甘薯、高粱等這些農作物來生產生物燃料乙醇成本非常高,無法廣泛開展工業生產模式。然而,我國是個秸稈資源十分豐富的國家,各種農作物的秸稈廣泛分布,種類繁多。我國每年的農作物秸稈產量在七億噸以上,但是有效利用率低于五成[1],這不僅使得農村的環境日益變得嚴重,而且也造成了資源的浪費,無法可持續利用。農作物秸稈主要成分為纖維素、木質素和半纖維素。纖維素是由β-D-葡萄糖基通過1,4-糖苷鍵聯結而成的大分子聚合物,一般是不溶于水、稀堿、稀酸和一些有機溶劑的。纖維素、半纖維素和果膠共同組成植物的細胞壁。纖維素外表面由木質素和半纖維素包裹著[2]。因此利用微生物發酵產生燃料乙醇,這不僅可以解決燃料問題、環境問題,而且可以增加農民的收入。我通過多步驟、多條件的篩選高產纖維素酶的菌株,來對秸稈處理,提高真菌分解秸稈中纖維素的降解率。 纖維素酶產生真菌分離純化與鑒定:http://www.aftnzs.live/shengwu/20190419/32255.html
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