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山羊肌肉差異表達miRNA基因多態性分析

時間:2019-04-13 14:32來源:畢業論文
以徐淮山羊、波爾山羊和海門山羊等三個品種共計135個個體為材料,主要利用PCR-SSCP技術,經過①DNA的提取、濃度測定; ②定點擴增DNA序列;③擴增產物聚丙烯按凝膠電泳及染色

摘要:本研究以徐淮山羊、波爾山羊和海門山羊等三個品種共計135個個體為材料,主要利用PCR-SSCP技術,經過①DNA的提取、濃度測定; ②定點擴增DNA序列;③擴增產物聚丙烯按凝膠電泳及染色;④自動成像、基因型判定等操作,對山羊19個肌肉發育相關的重要miRNA進行遺傳變異研究,最終發現僅有miR-424-5p、miR-411-5p、NovelmiR-47、miR-541-3p和miRNA-767等其中5個基因座具有多態性。本研究中,多態信息含量在三個品種中的分布是一致的,只是在不同位點有所不同。除miRNA-411c-3p為低度多態外,其它4個變異位點均為中度多態。同時,在五個多態基因座中,三個山羊品種的大部分位點均處于Hardy-Weinberg平衡狀態,僅有Novel miR-47和miR-767在海門山羊和波爾山羊以及miR-541-3p在波爾山羊的上處于Hardy-Weinberg非平衡狀態。在本研究中,miR-411-5p和miR-767只檢測到兩種帶型,即AA型和AB型,沒有BB純合型。34460
畢業論文關鍵詞:DNA提取,PCR,SSCP,測序,多態性
Ploymorphism analysis of miRNA gene’s differential expression in goat muscle
Abstract: We had three varieties of goats to conduct the study . They are Xuhuai goat (XH , n=45) , Boer goat (BE , n=45) and Haimen goat (HM , n=45) . The technique of PCR-SSCP was taken to do the research about genetic variation on 19 miRNAs related to the development of muscle . Finally , we found that there are only 5 of them indicated ploymorphism , and they are miR-424-5p、miR-411-5p、NovelmiR-47、miR-541-3p and miRNA-767 . In this study , polymorphicsm information content turned to be accordant , just various at various loci . Apart from miRNA-411c-3p low polymorphism, the other 4 loci are medium polymorphism . At the same time, in the five polymorphic loci , most loci of the three varieties were in Hardy-Weinberg equilibrium, only Novell miR-47 and miR-767 in Haimen goat and Boer goat and miR-541-3p in Boer goat in Hardy Weinberg non-equilibrium state. In this study, miR-411-5p and miR-767 was detected with two type , AA type and AB type , but no BB type. 源¥自%六^^維*論-文+網=www.aftnzs.live
Key words: DNA extraction , PCR , SSCP , oder-checking , polymorphism
目錄
1 引言    1
2 實驗材料    2
2.1 實驗動物及血樣來源    2
2.2 實驗試劑    2
2.3 儀器設備    2
3 試驗方法    2
3.1 羊全血基因組DNA的提取    2
3.2 PCR反應所需引物設計    2
3.3 PCR-SSCP DNA標記分析    3
3.4 瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物    4
3.5 聚丙烯酰胺凝膠電泳和檢測    4
3.6 測序    4
3.7 統計分析方法    4
4 結果與分析    4
4.1 基因組DNA樣品檢測    4
4.2 候選miRNA遺傳變異檢測    4
4.2.1 NovelmiR-47基因遺傳變異檢測    5
4.2.2 miR-541-3p基因遺傳變異檢測    6
4.3 候選基因多態基因座的群體遺傳學分析    7
4.3.1 NovelmiR-47前體基因群體遺傳結構分析    7
4.3.2 miR-541-3p前體基因群體遺傳結構分析    8
5 討論    9
致謝    10
參考文獻    10
1 引言
    基因多態性在個體的繁殖過程中演繹了一個十分重要的角色,其導致了轉錄和翻譯的多樣性,這一特征十分有利于同時保證遺傳的準確性與寬容度,這對于生物界的穩定和多樣化起到了至關重要的作用。miRNA是一類非編碼單鏈小RNA,其長度大約為21~23nt,它們在進化上相對保守。miRNA通過靶向mRNA來使其降解,或抑制其翻譯,進而阻止靶蛋白形成。miRNA在各項生物學過程中發揮著重要的調節作用,并且在許多疾病中也都發現了miRNA的異常表達,由此也說明,基因的多態性與各種疾病有著密不可分的聯系。 山羊肌肉差異表達miRNA基因多態性分析:http://www.aftnzs.live/shengwu/20190413/31966.html
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