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影響PD發生的PINK1、Parkin協同因子的篩選及其功能的研究

時間:2019-04-07 20:34來源:畢業論文
以果蠅的S2細胞為模型,通過目標質粒的轉染、相關藥物的處理、應用免疫共沉淀、SDS凝膠電泳、蛋白質質譜等技術手段,篩選出協同因子。將Pink1和Parkin基因通過UAS-GAL4系統轉染到S2細胞

摘要:帕金森綜合征(Parkinson’s disease, PD)是常見的神經系統變性疾病,Pink1/Parkin信號通路在帕金森發病進程中的關鍵作用已得到證實。篩選pink1/parkin信號通路的協同因子,以更好地了解該通路的構成以及對線粒體功能的影響。本實驗以果蠅的S2細胞為模型,通過目標質粒的轉染、相關藥物的處理、應用免疫共沉淀、SDS凝膠電泳、蛋白質質譜等技術手段,篩選出協同因子。將Pink1和Parkin基因通過UAS-GAL4系統轉染到S2細胞中,采用差異的轉染方式以及MG132、CCCP的差異處理設置6個實驗組,免疫共沉淀選出與轉染基因相互作用的蛋白,然后將分離出來的蛋白用質譜法進行分析。通過對比質譜結果篩選出與本研究相關的協同因子,確定與其功能相關的蛋白。結果顯示,clueless、Upf2、germ line transcription factor 1這3個蛋白與pink1和parkin都有結合,初步推測這3個蛋白與pink1/parkin通路可能有密切聯系。34364
畢業論文關鍵詞:帕金森;PINK1;PARKIN;協同因子
Screening and Function of Proteins that Interact with Pink1 and Parkin in the PD Progression
Abstract: PD is one of the most common neurodegenerative disorder. The key role of Pink1/Parkin pathway in the PD progression had been proved. In order to get a better understanding of the mechanism and the impact on the mitochondrial function, we screen the cofactors of Pink1/Parkin pathway. We use S2 cell as the study model, applying transfection, drug treatment, IP, SDS-PAGE and MS to screen out proteins that interact with pink1 and parkin. Through transfect different plasmids, we set up six control groups. By appling IP technology, we can screen out specific proteins. Then we compare the MS results of the six groups to pick out the cofacters. Finally, the result show that the protein clueless, Upf2, germ line ranscription factor 1, interact with both pink1 and parkin and the study on their functions are under construct. 源¥自%六^^維*論-文+網=www.aftnzs.live
Key words: PD; PINK1; Parkin; Cofactor
目  錄
引言    1
PD的發病情況及目前診療方案的缺陷    1
果蠅在作為模式動物研究帕金森的優勢    1
1 材料與方法    2
1.1主要儀器    2
1.2 主要試劑與試劑的配置    3
1.3處理方式    3
2  操作流程    3
2.1載體的構建    3
2.1.1 PCR    3
2.1.2 瓊脂糖凝膠電泳    4
2.1.3 酶切和酶連    4
2.1.4轉化與質粒提取    4
2.2轉染與藥物處理    4
2.3免疫共沉淀    5
2.4 SDS-PAGE電泳    5
3 結果與分析    6
3.1 SDS-PAGE的結果    6
3.2 質譜的結果及分析    7
4討論    7
致謝    8
參考文獻    8
引言
 PD的發病情況及目前診療方案的缺陷
    帕金森綜合癥(Parkinson’s disease, PD)是常見的神經系統變性疾病,目前我國65歲以上人群總體患病率為1700/10萬,并隨年齡增長而升高[1]。隨著人口老齡化的推進以及人口平均壽命的延長,PD的發病率呈明顯上升,給家庭和社會都帶來了沉重負擔[2]。PD主要以黑質多巴胺能神經元進行性退變和路易小體形成的病理變化,紋狀體區多巴胺遞質降低、多巴胺與乙酰膽堿遞質失平衡的生化改變,震顫、肌強直、動作遲緩、姿勢平衡障礙的運動癥狀和嗅覺減退、便秘、睡眠行為異常和抑郁等非運動癥狀的臨床表現為顯著特征[3]。它是一種綜合性神經系統變性疾病,其病因尚未明確,與多種因素有關,遺傳因素、環境因素、年齡老化、氧化應激,甚至心理因素都有可能導致發病[4]。 影響PD發生的PINK1、Parkin協同因子的篩選及其功能的研究:http://www.aftnzs.live/shengwu/20190407/31837.html
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