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鯽魚心源維隆氣單胞菌的分離與鑒定

時間:2019-04-07 20:31來源:畢業論文
為了研究患病鯽魚的心臟中是否有維隆氣單胞菌(Aeromonas veronii),我們從患病鯽魚(Carassius aumtus))的心臟中分離純化獲得一株細菌,并給其命名為MX,通過形態學觀察、生理生化試驗、1

摘要:為了研究患病鯽魚的心臟中是否有維隆氣單胞菌(Aeromonas veronii),我們從患病鯽魚(Carassius aumtus))的心臟中分離純化獲得一株細菌,并給其命名為MX,通過形態學觀察、生理生化試驗、16SrRNA的克隆并測序等鑒定方式。結果表明:該株細菌為革蘭氏陰性短桿菌,在TSA培養基上都呈現為表面濕潤,隆起,透明,邊緣較整齊,乳白色的小菌落。且菌株MX 不發酵肌醇、衛矛醇、七葉苷、木糖醇等,硫化氫、MR、葡糖酸鹽為陰性;尿素、OF、精氨酸雙水解酶、蛋白胨水、VP試驗為陽性,可以初步判斷其為維隆氣單胞菌(A.veronii)。接著對MX菌株進行16S rRNA基因序列測定,其序列長度為1509bp,并通過對其系統進化樹看出,發現MX菌與維隆氣單胞菌模式菌株(ATCC 35624)的親緣性最近,并通過Megalign軟件計算得出,MX菌株與維隆氣單胞菌模式菌株(ATCC 35624)的同源性為99.87%,進一步鑒定MX菌株為維隆氣單胞菌(A.veronii)。本研究不僅為鯽魚細菌譜的擴充作出了貢獻,而且對鯽魚的養殖、疾病防治具有重要的意義。34362
畢業論文關鍵詞:鯽魚;維隆氣單胞菌;16SrRNA;生理生化試驗
Isolation and identification of Aeromonas veronii from heart of Carassius aumtus                                          
Abstract: A bacterial strain was isolated from the heart of Carassius aumtus and
named  MX.The morphological characteristic、main biological characteristic and 16S rRNA Sequencing and ananalysis of phylogenetic tree were carried out in this study.we can draw the conclusion:The MX strain was a short ,gram and negative bacillus . TSA are presented in the media as the surface moist,bumps,transparence,edge than the neat,white small colonies.MX could not produce inositol, galactitol, esculin,xylosic alcohol and so on,  hydrogen sulfide, MR, gluconate were negative; carbamide , OF,  Argininase, peptone water and VP test were positive.It can be initially judged as Aeromonas veronii . Based on 16S rRNA Sequencing ,It’s length of sequence was 1509bp.The phylogenetic tree demonstrated that MX was closest to Aeromonas veronii ATCC35624,and  the sequence homology was 99.87%,taken together,the strain MX was Aeromonas veronii.The study was not only contributing to the expansion of carp spectrum of bacteria, but also was of great significance for  breeding, disease prevention of carp.. 源¥自%六^^維*論-文+網=www.aftnzs.live
Keywords: Czrassius aumtus ;Aeromonas veronii;16SrRNA;biological characteristic
目錄
前言    1
1 實驗部分    2
1.1 材料    2
1.1.1實驗動物    2
1.1.2 實驗試劑及儀器    2
1.2 方法    2
1.2.1 菌種的分離純化    2
1.2.2菌種的保藏    2
1.2.3 生理生化鑒定    2
1.2.4細菌基因組DNA的提取    2
1.2.5PCR擴增    3
1.2.6瓊脂糖凝膠電泳    3
1.2.7膠回收    3
1.2.8TA克隆及測序    3
2、結果與分析    3
2.1細菌的形態學特征    3
2.2生理生化特性    4
2.316S rRNA克隆    5
2.416S rRNA序列分析    6
2.5檢索并構建系統發育樹    7
討論    8
致謝    9
參考文獻    9
前言
鯽魚(Carassius auratus)屬于常見淡水魚,鯽魚通過人工培育,能產生許多新型的鯽魚品種。鯽魚主要是植食性動物,在水中喜歡聚集在一塊,它本身營養成分很豐富,肉質非常鮮美,而且它的藥用價值高,被廣泛應用在各種藥材中,可為人體除羸祛乏,也可以開胃滋陰。鯽魚生活的區域比較廣泛,而且在春、秋兩季的時候味道尤為鮮美,是我國的重要食材之一。它身形在淡水魚中較長,最大的長度可達30CM,生長和活動的區域深度也較深,最深可達20米,沒有毒性,具有很高的經濟價值,且物美價廉。鯽魚在我國生長的區域屬黃河和長江流域比較多見。鯽魚具有繁殖能力強,生命能力強等特點,但近年其廣受細菌性疾病的困擾,如遲鈍愛德華菌[1]、溫和氣單胞菌[2]、這兩種菌均可以引起鯽魚生病甚至死亡。近幾年由維隆氣單胞菌(A.veronii)導致魚類的生病和死亡也逐漸引起了一些學者的注意,所以我們這個實驗目的研究的即是鯽魚心臟中是否存在維隆氣單胞菌(A.veronii),如果存在的話,怎樣對其進行分離鑒定。經過了解,維隆氣單胞菌(A.veronii),是一種常見的可以引起水產動物疾病的致病菌,如已報道黃顙魚【4】,患病的黃顙魚出現離群獨游、游動減緩、食欲減退并出現肛門紅腫等癥狀;金魚【5】,患病的金魚出現反應遲鈍、爛鰓、空腸、和血液不凝固等癥狀;框鏡鯉【6】,患病的框鏡鯉出現肛門紅腫、體表出現局部紅點等癥狀;羅非魚【7】,患病的羅非魚出現腸道腫大、有積液、肌肉輕微出血等癥狀;中華鱉【8】,患病的中華鱉出現行動遲緩、反應遲鈍及胃、腸壁出血等癥狀。本試驗從某發病鯽魚的病變的組織中無菌取出一株細菌,該病魚的主要癥狀為呈現行動怠惰,游動緩慢,長獨處水面,不久便死去,體表出現大面積鱗片脫落,和體表局部潰瘍,并出現鰭基充血等癥狀。所以我們根據以上癥狀,合理推測鯽魚心臟中的即為維隆氣單胞菌(A.veronii)。另外,此菌漸已成為重要的人--魚共患致病菌【9】,可以導致人體腹瀉、肺炎和傷口感染【10】,還能引起自身的腸胃炎【11】。維隆氣單胞菌(A.veronii)廣泛分布在污泥,水體、食物和動物機體中,其和豚鼠氣單胞菌、嗜水氣單胞菌及溫和氣單胞菌是多種水產動物重要的病原菌【12】。 鯽魚心源維隆氣單胞菌的分離與鑒定:http://www.aftnzs.live/shengwu/20190407/31835.html
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